Витамин с в напитках гост

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

НАПИТКИ АЛКОГОЛЬНЫЕ И БЕЗАЛКОГОЛЬНЫЕ

Определение кофеина, аскорбиновой кислоты и ее солей, консервантов и подсластителей методом капиллярного электрофореза

Alcoholic and non-alcoholic drinks and beverages. Determination of caffeine, ascorbic acid and its salts, preservatives and sweeteners using capillary electrophoresis method

ОКС 67.160.10
67.160.20
ОКП 91 8514
91 8519

Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. N 184-ФЗ «О техническом регулировании», а правила применения национальных стандартов Российской Федерации — ГОСТ Р 1.0-2004 «Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения»

Сведения о стандарте

1 РАЗРАБОТАН Группой компаний «Люмэкс» (Санкт-Петербург)

2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 335 «Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность»

3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 18 декабря 2008 г. N 648-ст

4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — в ежемесячно издаваемых информационных указателях «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

1 Область применения

Настоящий стандарт устанавливает метод капиллярного электрофореза для определения массовой концентрации кофеина, аскорбиновой кислоты и ее солей, консервантов (сорбиновой и бензойной кислот и их солей), подсластителей (ацесульфама , сахарина и его солей) в слабоалкогольных и безалкогольных напитках, винах и виноматериалах, соках и сокосодержащих напитках.

Диапазон измеряемых значений массовой концентрации указанных соединений составляет 10-1000 мг/дм .

Определению не мешают другие подсластители (аспартам, цикламат), синтетические пищевые красители, витамины группы В и ванилин в концентрациях, характерных для анализируемых напитков.

В условиях проведения анализа невозможно разделение индивидуальных форм нормирования сорбиновой, бензойной, аскорбиновой кислот и сахарина.

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике

ГОСТ Р ИСО/МЭК 17025-2006 Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий

ГОСТ Р 51144-98 Продукты винодельческой промышленности. Правила приемки и методы отбора проб

ГОСТ Р 52501-2005 (ИСО 3696:1987) Вода для лабораторного анализа. Технические условия

ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 4199-76 Реактивы. Натрий тетраборнокислый 10-водный. Технические условия

ГОСТ 4328-77 Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия

ГОСТ 6687.0-86 Продукция безалкогольной промышленности. Правила приемки и методы отбора проб

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 10652-73 Реактивы. Соль динатриевая этилендиамин-N,N,N’,N’-тетрауксусной кислоты 2-водная (трилон Б). Технические условия

ГОСТ 24104-2001* Весы лабораторные. Общие технические требования
________________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 53228-2008, здесь и далее по тексту. — Примечание изготовителя базы данных.

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 26313-84 Продукты переработки плодов и овощей. Правила приемки, методы отбора проб

ГОСТ 29169-91 (ИСО 648-77) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки с одной отметкой

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3 Термины и определения

В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:

3.1 форма нормирования: Конкретная химическая форма аскорбиновой, сорбиновой, бензойной кислот и сахарина, содержание которой нормируется в напитке.

3.2 форма определения: Химическая форма аскорбиновой, сорбиновой, бензойной кислот и сахарина, в единицах массовой концентрации которой выражается результат измерений при обработке электрофореграмм с использованием градуировочной зависимости.

3.3 форма взвешивания: Химическая форма аскорбиновой, сорбиновой, бензойной кислот и сахарина, используемая для приготовления исходного раствора путем взятия навески.

4 Сущность метода

Метод измерений основан на разделении и количественном определении массовой концентрации анализируемых компонентов методом капиллярного электрофореза в варианте мицеллярной электрокинетической хроматографии. Детектирование проводят по собственному поглощению компонентов при длине волны 254 нм.

5 Средства измерений, стандартные образцы, вспомогательное оборудование, реактивы, материалы

Система капиллярного электрофореза (например [1]) (далее — прибор) с положительной полярностью источника высокого напряжения от 1 до 25 кВ, оснащенная кварцевым капилляром (внутренний диаметр 75 мкм, эффективная длина не менее 50 см), фотометрическим или спектрофотометрическим детектором, позволяющим регистрировать оптическое поглощение в диапазоне длин волн от 220 до 280 нм, и компьютером с программным обеспечением для регистрации и обработки электрофореграмм.

Весы лабораторные общего назначения высокого или специального класса точности по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания 200 или 210 г и ценой наименьшего деления не более 0,1 мг.

Пипетки градуированные 2-го класса точности вместимостью 1, 2, 5 см по ГОСТ 29227.

Колбы мерные 2-го класса точности вместимостью 25, 100, 1000 см по ГОСТ 1770.

Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью 50 см по ГОСТ 1770.

Пипетка с одной отметкой 2-го класса точности вместимостью 5, 10 и 50 см по ГОСТ 29169.

Дозаторы пипеточные одноканальные переменного объема от 10 до 100 и от 100 до 1000 мм .

рН-метр любого типа с диапазоном измерений рН от 1 до 14 с пределом допускаемой абсолютной погрешности не более ±0,05.

Центрифуга лабораторная с частотой вращения не менее 5000 мин .

Пробирки одноразовые типа Эппендорф вместимостью 1,5 см [2].

Колбы плоскодонные вместимостью 100 см по ГОСТ 25336.

Насос водоструйный по ГОСТ 25336.

Баня водяная.

Фильтры целлюлозно-ацетатные, размер пор 0,2 мкм, диаметр 25 мм [3].

Оправа для целлюлозно-ацетатного фильтра.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709 или вода для лабораторного анализа по ГОСТ Р 52501 первой степени чистоты.

Натрий тетраборнокислый, стандарт-титр, молярная концентрация 0,05 моль/дм (молярная концентрация эквивалента 0,1 моль/дм ) или натрий тетраборнокислый десятиводный, х.ч. по ГОСТ 4199.

Додецилсульфат натрия, ч.д.а. или х.ч. [4].

Гидроксид натрия, х.ч. по ГОСТ 4328.

Этилендиамин — N,N,N’,N’-тетрауксусной кислоты динатриевая соль, 2-водная (трилон Б), ч.д.а. по ГОСТ 10652.

Сорбат калия, массовая доля основного вещества не менее 99%.

Аскорбиновая кислота, фармакопейная.

Бензоат натрия, ч. [5].

Кофеин фармакопейный или импортный, массовая доля основного вещества не менее 99%.

Ацесульфам , массовая доля основного вещества не менее 99%.

Сахаринат натрия кристаллогидрат, массовая доля основного вещества не менее 99%.

Допускается использование других средств измерений, материалов и реактивов, имеющих аналогичные или лучшие метрологические и технические характеристики.

6 Отбор проб

Отбор проб вин и виноматериалов — по ГОСТ Р 51144, алкогольных и безалкогольных напитков — по ГОСТ 6687.0, соков и сокосодержащих напитков — по ГОСТ 26313.

7 Подготовка к проведению испытаний

7.1 Подготовка стеклянной посуды

Для мытья стеклянной посуды используют только концентрированную серную кислоту или концентрированную азотную кислоту. После мытья кислотой посуду многократно ополаскивают дистиллированной водой.

7.2 Приготовление вспомогательных растворов

7.2.1 Приготовление раствора гидроксида натрия массовой концентрации 20 г/дм

В мерную колбу вместимостью 100 см помещают от 50 до 60 см дистиллированной воды, 2 г гидроксида натрия, тщательно перемешивают. По окончании растворения доводят дистиллированной водой до метки. Срок хранения в сосуде из полиэтилена с плотно завинчивающейся крышкой — не более 2 мес.

7.2.2 Приготовление раствора натрия тетраборнокислого молярной концентрации 0,05 моль/дм (молярная концентрация эквивалента 0,1 моль/дм )

Раствор готовят из стандарт-титра по прилагаемой к нему инструкции. Раствор сохраняют в плотно закрытом полиэтиленовом сосуде в условиях, исключающих поглощение углекислого газа. Срок хранения — не более 2 мес.

При отсутствии стандарт-титра раствор готовят в мерной колбе вместимостью 1000 см путем растворения 19,07 г натрия тетраборнокислого десятиводного в свежепрокипяченной дистиллированной воде и разбавления до метки этой же водой.

7.2.3 Приготовление раствора додецилсульфата натрия молярной концентрации 0,2 моль/дм

В мерную колбу вместимостью 25 см помещают 1,44 г додецилсульфата натрия, добавляют 10 см дистиллированной воды, тщательно перемешивают, выдерживают на водяной бане при температуре от 40 °С до 45 °С до полного растворения и после охлаждения доводят до метки дистиллированной водой. Срок хранения раствора — не более 3 мес.

7.2.4 Приготовление рабочего буферного раствора (ведущий электролит)

В мерную колбу вместимостью 25 см помещают при помощи пипеток 5 см раствора натрия тетраборнокислого по 7.2.2, 5 см раствора додецилсульфата натрия по 7.2.3 и доводят до метки дистиллированной водой. Тщательно перемешивают и фильтруют через целлюлозно-ацетатный фильтр в другой сосуд с завинчивающейся крышкой, отбрасывая первую порцию фильтрата от 1 до 1,5 см .

В ведущем электролите молярная концентрация натрия тетраборнокислого составляет 10 ммоль/дм , молярная концентрация додецилсульфата натрия 40 ммоль/дм .

Срок хранения раствора в сосуде из полиэтилена — не более 1 мес.

Перед использованием рабочий буферный раствор дегазируют центрифугированием от 3 до 5 мин при частоте вращения 5000 мин .

Примечание — При необходимости объем приготавливаемого буферного раствора можно уменьшить или увеличить.

7.2.5 Приготовление раствора трилона Б молярной концентрации 0,05 моль/дм

В мерную колбу вместимостью 100 см вносят 1,86 г трилона Б, добавляют от 50 до 60 см дистиллированной воды, выдерживают на водяной бане при температуре не более 50 °С до полного растворения, охлаждают, доводят до метки дистиллированной водой и тщательно перемешивают. Срок хранения раствора в сосуде из полимерного материала — не более одного года.

7.3 Приготовление растворов для проведения градуировки прибора

7.3.1 Приготовление исходных растворов определяемых компонентов номинального значения массовой концентрации 1000 мг/дм

В мерную колбу вместимостью 25 см помещают навеску соответствующей формы взвешивания соединения (см. таблицу 1), допускаемое отклонение массы навески от указанного в таблице 1 составляет ±5 мг. Навеску растворяют в дистиллированной воде. При приготовлении раствора аскорбиновой кислоты добавляют 2,5 см раствора трилона Б (см. 7.2.5). Разбавляют до метки дистиллированной водой и тщательно перемешивают.

Действительное значение массовой концентрации исходного раствора , мг/дм , вычисляют по формуле

где — масса навески, мг;

— объем приготовленного раствора, дм ;

— фактор пересчета (см. таблицу 1);

— номер компонента.

Срок хранения исходных растворов в холодильнике при температуре (4±2) °С приведен в таблице 1.

где — массовая концентрация -го компонента в исходной смеси, использованного для приготовления данной смеси, мг/дм ;

— объем исходной смеси, использованный для приготовления данной смеси, см ;

— объем приготовленной смеси, см .

Срок хранения градуировочных смесей в холодильнике при температуре (4±2) °С — не более 2 сут.

Рекомендуемый состав градуировочных смесей приведен в таблице 2.

Таблица 2 — Массовая концентрация компонентов в градуировочных смесях

Аскорбиновая кислота, сорбиновая кислота

7.3.3 Приготовление контрольной смеси

Контрольную смесь используют для проверки работоспособности системы и для контроля стабильности градуировочной характеристики.

В мерную колбу вместимостью 25 см помещают по 0,5 см исходного раствора каждого определяемого компонента (см. 7.3.1), доводят до метки дистиллированной водой и тщательно перемешивают. Номинальные значения массовой концентрации компонентов составляют 20 мг/дм . Действительные значения массовой концентрации компонентов рассчитывают по формуле (2).

Срок хранения контрольной смеси в холодильнике при температуре (4±2) °С — не более 3 сут.

В качестве контрольной смеси допускается использовать градуировочную смесь N 2.

Примечание — Допускается использование иной по качественному и количественному составу контрольной смеси, содержащей определяемые компоненты в концентрациях, соответствующих диапазону построения градуировочной характеристики.

7.4 Подготовка прибора

Подготовку прибора к измерениям проводят в соответствии с руководством (инструкцией) по эксплуатации. Задают рабочую длину волны спектрофотометрического детектора 254 нм, рабочее напряжение 25 кВ, рабочую температуру 20 °С (при наличии опции), а также параметры ввода проб (время, давление), руководствуясь рекомендациями изготовителя прибора. В карусель автосемплера (при его наличии) помещают растворы, необходимые для промывки капилляра, ведущий электролит, градуировочные смеси и/или подготовленные пробы.

7.5.1 Подготовка нового капилляра

Новый капилляр промывают последовательно по 10 мин дистиллированной водой, раствором гидроксида натрия (см. 7.2.1), дистиллированной водой и ведущим электролитом (см. 7.2.4).

7.5.2 Ежедневная подготовка капилляра

В начале рабочего дня капилляр промывают по 5 мин раствором гидроксида натрия (см. 7.2.1) и дистиллированной водой и 10 мин ведущим электролитом (см. 7.2.4). Все промывочные растворы собирают в сливную пробирку, не погружая в нее выходной конец капилляра.

Затем капилляр промывают ведущим электролитом при напряжении 25 кВ в течение 5 мин и проводят контроль стабильности градуировочной характеристики по 7.7.

Между анализами образцов капилляр промывают рабочим буферным раствором в течение 3 мин.

После завершения работ по анализу проб капилляр промывают 10 мин дистиллированной водой и оставляют концы капилляра погруженными в пробирки с дистиллированной водой.

Примечание — При работе с пробами на электрофореграмме может наблюдаться дрейф базовой линии, появление ступеней и смещение времен миграции компонентов, что связано с возможным мешающим влиянием матричных компонентов или примесей. В этом случае рекомендуется:

— увеличивать время промывки ведущим электролитом между анализами;

— проводить короткую промывку под напряжением ведущим электролитом;

— при появлении ступеней заменять свежими порциями рабочий буферный раствор в пробирках на входе и на выходе капилляра;

— промывать капилляр по 3 мин раствором гидроксида натрия, дистиллированной водой и ведущим электролитом.

7.5.3 Хранение капилляра

При перерывах в работе не более одной недели капилляр промывают 10 мин дистиллированной водой и оставляют концы капилляра погруженными в пробирки с дистиллированной водой.

При перерывах в работе на более длительный срок капилляр высушивают и оставляют в сухом состоянии. После сухого хранения для восстановления работоспособности капилляр готовят к работе по 7.5.1.

7.6 Градуировка прибора

Для проведения градуировки прибора анализируют не менее двух раз градуировочные смеси, приготовленные по 7.3.2. Капилляр после каждого анализа промывают по 7.5.2. Непосредственно перед анализом градуировочные растворы центрифугируют в течение 5 мин при частоте вращения 5000 мин .

Регистрируют не менее двух электрофореграмм каждой градуировочной смеси, проверяют правильность автоматической разметки пиков и при необходимости корректируют ее и проводят градуировку прибора, устанавливая параметры градуировочной характеристики и время миграции каждого компонента.

Задают ширину окна идентификации не более 5%. Рассчитывают отклонения рассчитанных значений массовой концентрации компонентов в каждой градуировочной точке от действительных значений и коэффициент корреляции.

Градуировочная характеристика должна соответствовать следующим требованиям:

— относительное отклонение рассчитанного значения от действительного значения массовой концентрации компонента в градуировочной смеси не более ±6% для кофеина и сахарината натрия и не более ±10% для остальных компонентов. Вместо относительного отклонения качество градуировочной характеристики может быть оценено по относительному стандартному отклонению, значение которого должно быть не более 3% для кофеина и сахарината натрия и не более 5% для остальных компонентов [6];

— коэффициент корреляции не менее 0,99.

Градуировку прибора проводят заново при замене капилляра, после проведения ремонта или длительного простоя прибора, при смене партии хотя бы одного из компонентов ведущего электролита, при изменении одного из условий проведения анализа (температуры, рабочего напряжения, времени и/или давления при вводе пробы), а также при неудовлетворительных результатах контроля стабильности градуировочной характеристики (см. 7.7).

7.7 Контроль стабильности градуировочной характеристики

Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале рабочего дня после промывки капилляра согласно 7.5.2, используя контрольную смесь по 7.3.3.

Регистрируют не менее двух электрофореграмм контрольной смеси в условиях, соответствующих анализу градуировочных растворов, проводят автоматическую идентификацию компонентов, установив ширину окна идентификации 5%, и при необходимости вносят программную коррекцию времени миграции. При помощи градуировочной зависимости (см. 7.6) рассчитывают массовую концентрацию компонентов для каждого ввода.

Проверяют сходимость значений массовой концентрации компонентов по формуле

где — среднеарифметическое значений массовой концентрации -го компонента в контрольной смеси, полученных по первой и второй электрофореграммам, мг/дм ;

и — массовая концентрация -го компонента в растворе, полученная по первой и второй электрофореграммам соответственно, мг/дм .

Градуировочная зависимость признается стабильной, если выполняется условие:

где * — действительное значение массовой концентрации компонента в контрольной смеси (см.7.3.3), мг/дм ;

— среднеарифметическое значений массовой концентрации компонента в контрольной смеси, полученных по первой и второй электрофореграммам, мг/дм ;

— норматив контроля стабильности градуировочной характеристики, %.
_______________
* Формула и экспликация к ней соответствуют оригиналу. — Примечание изготовителя базы данных.

Значение принимают равным 0,8 , где — доверительные границы допускаемой относительной погрешности (см. таблицу 4).

Если условие (4) не выполняется, то промывают капилляр по 7.5.2, процедуру контроля повторяют и при повторном получении неудовлетворительного результата контроля градуировку прибора проводят заново.

8 Проведение испытаний

8.1 Подготовка проб

Если проба не содержит осадка или взвешенных частиц, то ее центрифугируют в течение 5 мин при частоте вращения 5000 мин , переносят в сухой чистый сосуд или пробирку типа Эппендорф и анализируют согласно 8.2.

Образцы газированных напитков предварительно дегазируют. Для этого порцию напитка не менее 50 см помещают в коническую колбу вместимостью 100 см и подключают к водоструйному насосу. Дегазируют в течение 10-15 мин. После дегазирования пробу центрифугируют, как описано выше, и направляют на анализ.

Пробы напитков, в которых определяют содержание аскорбиновой кислоты, вскрывают непосредственно перед проведением испытаний. Вскрытую пробу хранят не более 6 ч плотно закупоренной, не допуская попадания воздуха и прямых солнечных лучей.

Рекомендуется после вскрытия упаковки пробу законсервировать добавлением раствора трилона Б. Для этого в мерную колбу вместимостью 100 см пипеткой помещают 10 см раствора трилона Б (см. 7.2.5), затем пипеткой отбирают 50 см анализируемой пробы, помещают в эту же мерную колбу и доводят до метки дистиллированной водой. Тщательно перемешивают. Срок хранения законсервированной пробы в холодильнике при температуре (4±2) °С — не более 3 сут.

Если проба содержит осадок или взвешенные частицы, то ее гомогенизируют и отбирают две аликвоты. Каждую аликвоту центрифугируют в течение 5 мин при частоте вращения 5000 мин . Затем отбирают верхний надосадочный слой жидкости и переносят в сухой чистый сосуд или пробирку типа Эппендорф для дальнейшего анализа. Если такую пробу необходимо разбавить (см. 8.2) или законсервировать раствором трилона Б, то ее сначала тщательно перемешивают, затем отбирают аликвоту, переносят в соответствующую мерную колбу, доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают. После этого разбавленную и/или законсервированную пробу центрифугируют 5 мин при частоте вращения 5000 мин , надосадочный слой переносят в сухой чистый сосуд или пробирку типа Эппендорф и анализируют согласно 8.2.

где — объем разбавленной пробы, см ;

— объем аликвотной порции пробы, взятой для разбавления, см .

Примеры электрофореграмм приведены в приложении А.

Примечание — На электрофореграммах некоторых проб могут наблюдаться дополнительные пики, принадлежащие, в частности, витаминам группы В (после пика кофеина), ванилину (после пика аскорбиновой кислоты) и синтетическим пищевым красителям (перед или после пика ацесульфама ). В случае неудовлетворительного разделения пиков аскорбиновой кислоты и ванилина (разрешение меньше 0,7) необходимо изменить условия анализа, установив температуру 45 °С, и построить градуировочную характеристику для аскорбиновой кислоты при этих условиях.

9 Обработка результатов испытаний

где — результат измерения массовой концентрации компонента в пробе по 8.2, мг/дм ;

— коэффициент разбавления пробы по 8.2. Если разбавление не проводилось, то 1;

— коэффициент разбавления пробы при консервации трилоном Б по 8.1 ( 2). Если консервация проб не проводилась, то 1.

При анализе проб, не содержащих осадка и взвешенных частиц, в качестве результата измерения массовой концентрации определяемого компонента принимается результат единичного измерения, вычисляемый по формуле (6).

Если анализируются две аликвотные порции (пробы, содержащие осадок или взвешенные частицы), то за результат измерения массовой концентрации компонента в пробе принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений, для которых выполняется условие:

где — максимальный результат параллельного определения, мг/дм ;

— минимальный результат параллельного определения, мг/дм ;

— значение предела повторяемости (см. таблицу 4),%.

— среднеарифметическое значение результатов параллельных определений, мг/дм .

При невыполнении неравенства (7) используют методы проверки приемлемости результатов параллельных определений и установления окончательного результата измерений согласно ГОСТ Р ИСО 5725-6 (подраздел 5.2).

Если результаты измерений массовой концентрации компонентов необходимо предоставить в пересчете на определенные формы нормирования, то значения, полученные по формуле (6), умножают на соответствующие коэффициенты пересчета. Например, для наиболее часто встречающихся солей бензойной и сорбиновой кислот значения коэффициентов пересчета приведены в таблице 3.

источник

ГОСТ 24556-89
Продукты переработки плодов и овощей. Методы определения витамина C

Купить ГОСТ 24556-89 — бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО «ЦНТИ Нормоконтроль»

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
Курьерская доставка (7 дней)
Самовывоз из московского офиса
Почта РФ

Распространяется на продукты переработки плодов и овощей и устанавливает методы определения витамина С: титриметрический с визуальным титрованием — для определения аскорбиновой кислоты в продуктах, дающих светлоокрашенные экстракты; титриметрический с потенциометрическим титрованием и фотометрический для определения аскорбиновой кислоты в продуктах, дающих темноокрашенные экстракты; титриметрический с цистеином и флуорометрический для определения суммы аскорбиновой и дегидроаскорбиновой кислот.

Переиздание. Апрель 2003 г.

ПРОДУКТЫ ПЕРЕРАБОТКИ ПЛОДОВ И ОВОЩЕЙ

МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИТАМИНА С

ИНК ИЗДАТЕЛЬСТВО СТАНДАРТОВ Москва

ПРОДУКТЫ ПЕРЕРАБОТКИ ПЛОДОВ И ОВОЩЕЙ

Методы определения витамина С ГОСТ

24556-89

Products of fruits and vegetables processing.

Methods for determination of vitamin C

Настоящий стандарт распространяется на продукты переработки плодов и овощей и устанавливает методы определения витамина С: тнтриметрическнй с визуальным титрованием — для определения аскорбиновой кислоты в продуктах, дающих светлоокрашенные экстракты: титриметрический с потенциометрическим титрованием и фотометрический для определения аскорбиновой кислоты в продуктах, дающих темноокрашенные экстракты; титри метрический с цистеином и флуорометрнческий для определения суммы аскорбиновой и дегилроаскорбиновой кислот.

Методики предназначены для определения витамина С в продуктах с массовой долей не менее I • 10“ 3 %; при использовании флуорометрнческого метода — не менее 2.5 • 10

Отбор и подготовка проб к испытанию — по ГОСТ 26313.

Метод основан на экстрагировании витамина С раствором кислоты (соляной, метафосфорной или смесью уксусной и метафосфорной) с последующим титрованием визуально или потенциомет-ричсскн раствором 2.6-дихлорфснолиндофенолята натрия до установления светло-розовой окраски.

2.2. Аппаратура, материалы и реактивы

Весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104*. 1-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г.

Весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания 500 г и допускаемой погрешностью ± 0,01 г.

pH-метр-м идл и вольтметр лабораторный для измерения pH и окислительно-восстановительных потенциалов с диапазонами от минус I до плюс 14 мВ и погрешностью не более ±0.05 при измерении pH и диапазонами от минус 100 до плюс 1400 мВ и погрешностью не более ± 5 мВ при измерении окислительно-восстановительных потенциалов. При измерении окислительно-восстановительных потенциалов используют электроды: измерительный — платиновый, вспомогательный — хлорсереб-ряный.

Мешалка магнитная с плавным регулированием частоты вращения.

Секундомер с погрешностью 0,2 с.

Воронки лабораторные стеклянные по ГОСТ 25336 диаметром от 5 до 10 см.

Колбы мерные лабораторные стеклянные по ГОСТ 1770 вместимостью 100,500, 1000. 2000 см 3 .

• С I толя 2002 г. введен в действие ГОСТ 24104-2001 (здесь и далее).

Издание официальное Перепечатка воспрещена

Колбы лабораторные стеклянные по ГОСТ 25336 вместимостью 50,100, 250 см 3 .

Микробюретка по НТД с иеной деления не более 0,01 см 3 .

Пипетки мерные лабораторные стеклянные по НТД исполнений 1.4 и 5 1-го класса точности вместимостью I см 3 ; исполнений 1,4 и 5, I и 2-го классов точности вместимостью 2 см 3 ; исполнений 2,3.6 и 7, I и 2-го классов точности вместимостью 5, 10. 20, 25 см 3 .

Стаканы лабораторные стеклянные по ГОСТ 25336 вместимостью 50,100,1000 см 3 .

Ступка и пестик лабораторные фарфоровые по ГОСТ 9147 соответственно с наружным диаметром 70 или 90 мм и высотой 90 мм.

Цилиндры мерные лабораторные стеклянные по ГОСТ 1770 вместимостью 100, 250 см 3 .

Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026.

Песок кварцевый очищенный и прокаленный по ГОСТ 28561 п. 2.2.

2,6-дихлорфе нол индофенол яг натрия, раствор массовой концентрации 0,250 г/дм 3 .

Кислота аскорбиновая должна соответствовать требованиям Государственной фармакопеи СССР. иэд. X. растворы массовыми концентрациями 1.0 и 0.1 г/дм 3 .

Кислота азотная по ГОСТ 4461 плотностью 1,41 г/см 3 , раствор с объемной долей 25 %.

Кислота метафосфорная по ГОСТ 841, растворы с массовой долей 3 и 6 %. Раствор с массовой долей 3 % готовят вдень испытаний разбавлением раствора с массовой долей 6 %. Раствор с массовой долей 6 % хранят в холодильнике в течение 10 дней.

Кислота соляная по ГОСТ 3118 плотностью 1,19 г/см 3 , раствор с массовой долей 2 %.

Кислота уксусная ледяная по ГОСТ 61 и раствор с массовой долей 3 %.

Кислота хлорная, раствор молярной концентрации 0,1 моль/дм 3 . Готовят перед обработкой электродов.

Кислота этилсндиаминтетрауксусная или двунатриевая соль кислоты, растворе массовой долей

Калин йодистый по ГОСТ 4232, раствор с массовой долей I % в растворе уксусной кислоты с массовой долей 3 %. Готовят перед обработкой электродов.

Натрий уксуснокислый плавленый, насыщенный раствор, готовят следующим образом: 200 г соли растворяют в 300 см 3 волы.

Формальдегид, раствор с массовой долей 36—40 %.

Допускается применение импортной аппаратуры, лабораторной посуды и реактивов по классу точности и качеству не ниже отечественных.

Для проведения испытания, если нет других указаний, применяют реактивы квалификации «чистый для анализа» (ч.д.а.) и дистиллированную воду или воду эквивалентной чистоты.

2.3. Подготовка к испытанию

2.3.1. Приготовление экстрагирующего раствора

В качестве экстрагирующего раствор;! используют растворы кислот — соляной с массовой долей 2 %, метафосфорной с массовой долей 3 % или смеси уксусной и метафосфорной кислот, которую готовят следующим образом: 15 г метафосфорной кислоты растворяют в 250 см 3 дистиллированной воды, прибавляют 40 см 3 ледяной уксусной кислоты, доводят водой до объема 500 см 3 , перемешивают и фильтруют в склянку с притертой пробкой. Хранят в холодильнике не более 10 дней.

2.3.2. Приготовление стандартных растворов аскорбиновой кислоты

Для приготовления раствора аскорбиновой кислоты концентрации 1,0 г/дм 3 взвешивают 0,1000 г аскорбиновой кислоты с погрешностью не более ± 0,0001 г, растворяют в экстрагирующем растворе в мерной колбе вместимостью 100 см 3 , доводят до метки тем же раствором и перемешивают.

Для приготовлення раствор;! концентрации 0.1 г/дм 3 вносят пипеткой 10 см 3 раствора аскорбиновой кислоты концентрации 1.0 г/дм 3 в мерную колбу вместимостью 100 см 3 , доводят до метки экстрагирующим раствором и перемешивают.

Растворы аскорбиновой кислоты неустойчивы, поэтому их готовят перед проведением испытания.

2.3.3. Приготовление раствора 2,6-днхлорфенолиндофенолята натрия и определение его титра

0,05 г 2.6-днхлорфенолиндофенолята натрия растворяют приблизительно в 150 см 3 горячей

воды, предварительно прокипяченной в течение 30 мин или содержащей 0,042 г двууглекислого натрия, охлаждают до комнатной температуры, доводят до объема 200 см 3 той же охлажденной водой, перемешивают и фильтруют в темную склянку. Раствор хранят в холодильнике не более 10 дней.

Титр раствор;! 2.6-днхлорфеналнндофсналята натрия устанавливают по стандартному раствору

аскорбиновой кислоты концентрации 1,0 и 0.1 г/дм 3 вдень проведении испытания. Для этою в две колбы вместимостью 50 или 100 см 3 , в которые предварительно прибавлено по 9 см 3 волы, вносят пипеткой по I см 3 раствора аскорбиновой кислоты и быстро титруют раствором 2,6-дихлорфено-линдофенолята натрия до светло-розовой окраски, не исчезающей в течение 15—20 с.

Одновременно проводят контрольное испытание. Для этого в колбу вместимостью 50 или 100 см 3 вносят I см 3 экстрагирующего раствора. 9 см 3 дистиллированной воды и титруют раствором

Титр раствор;» 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия в граммах аскорбиновой кислоты, эквивалентного одному кубическому сантиметру раствора 2,6-дихлорфенолнндофенолята натрия, вычисляют по формуле

где т — масса аскорбиновой кислоты, содержащаяся в I см 3 стандартного раствора, г;

У, — объем раствора 2,6-дихлорфенолнндофенолята натрия, израсходованный на титрование стандартного раствор;! аскорбиновой кислоты, см 3 ;

V₂ — объем раствора 2.6-ди.хлор енолиндофенолята натрия, израсходованный на контрольное испытание, см 3 .

2.3.4. Приготовление раствора ацетатного буферного, с pH 4 готовят следующим образом: растворяют 300 г безводного уксуснокислого натрия в 700 см 3 дистиллированной воды, добавляют 1000 см 3 ледяной уксусной кислоты, перемешивают и с помощью pH-метра устанавливают pH 4, добавляя, при необходимости, снова кислоту.

2.3.5. Подготовка электродов для потенциометрического титрования

Измерительный платиновый электрод помещают в стакан вместимостью 50 см 3 с раствором азотной кислоты, кипятят от 5 до 10 мин, промывают дистиллированной водой и оставляют в воде от 2 до 3 суг. Затем измерительный и вспомогательный электроды опускают в стакан вместимостью 100 см 3 с раствором хлорной кислоты и замыкают накоротко (т.е. соединяют клеммы между собой). Через 2 ч электроды вынимают, не размыкая, промывают дистиллированной водой и помещают в стакан вместимостью 50 см 3 : измерительный — с раствором йодистого калия, вспомогательный — с дистиллированной водой. Через 15 мин электроды размыкают, измерительный электрод промывают дистиллированной водой.

Обработке подвергают электроды, нс бывшие в употреблении, или после перерыв;! в работе более 6 мес. Хранят в стакане с дистиллированной водой.

Для приготовления экстракта навеску пробы массой от 5 до 50 г взвешивают с погрешностью ±0,01 г.

2.4.1.1. Для экстрагирования вшамина С из сухих продуктов навеску пробы от 5 до 10 г растирают в ступке с небольшими количествами экстрагирующего раствора кислоты или смеси кислот (нс менее I см 3 раствора на I г пробы) и песка, переносят в мерную колбу или мерный цилиндр вместимостью 100 см 3 , смывая ступку и пестик небольшими порциями экстрагирующего раствора до тех пор, пока объем нс достигнет метки. Содержимое выдерживают в течение 10 мин, перемешивают и фильтруют.

2.4.1.2. Для экстрагирования витамина С из продуктов плотной консистенции навеску пробы от 5 до 50 г гомогенизируют нс более 2 мин с небольшим количеством экстрагирующего раствора (не менее I см 3 раствора на I г пробы) и переносят в мерные колбу или цилиндр вместимостью 100 см 3 , смывая гомогенизатор небольшими порциями экстрагирующего раствора до тех пор, пока объем не достигнет метки. Содержимое выдерживают в течение 10 мин, перемешивают и фильтруют.

2.4.1.3. Для экстрагирования витамина С из жидких продуктов навеску пробы от 5 до 50 г переносят в мерные колбы или цилиндр вместимостью 100 см 3 , смывая стенки стакана небольшими порциями экстрагирующего раствора до тех пор, пока объем не достигнет метки. Содержимое выдерживают в течение 10 мин, перемешивают и фильтруют.

2.4.1.4. При исследовании продуктов, содержащих диоксид серы (SO,), навеску пробы от 5 до 50 г обрабатывают в зависимости от вида продукта, как указано в пп. 2.4.1.1—2.4.1.3, переносят в мерные колбу или цилиндр вместимостью 100 см 3 , добавляют ацетон в объеме, равном ‘/₅ части массы навески, перемешивают доводят до метки экстрагирующим раствором. Содержимое выдерживают 10 мин, снов;! перемешивают и фильтруют.

2.4.1.5. При исследовании продуктов, фасованных в металлическую тару, навеску пробы от 5 до 30 г обрабатывают в зависимости от вида продукта, как указано в пп. 2.4.1.1—2.4.1.3, переносят в мерные колбу или цилиндр вместимостью 100 см 3 при помощи экстрагирующего раствора, доводят до объема 50 см 3 и перемешивают. Через 10 мин прибавляют 10 см 3 насыщенного уксуснокислого натрия или 30 см 3 ацетатного буферного раствора, прибавляют 10 см 3 раствора этилендиамннтетра-уксусной кислоты или ее соли, перемешивают, доводят до метки экстрагирующим раствором, снова перемешивают и фильтруют.

2.4.1.6. Полученные экстракты сразу используют для титрования.

2.4.2. Визуальное титрование

2.4.2.1. В колбу вместимостью 50 или 100 см 3 пипеткой вносят от 1 до 10 см 3 экстракта, полученного по п. 2.4.1, доводят объем водой до 10 см 3 и титруют раствором 2.6-днхлорфенолин-дофенолята натрия до пояатения слабо-розовой окраски, нс исчезающей в течение 15—20 с.

2.4.2.2. Одновременно проводят контрольное испытание на содержание в продукте редуцирующих веществ. Для этого в колбу помешают такой же объем экстракта, как при определении по п. 2.4.2.1. прибаатяют равный ему объем ацетатного буферного раствора, раствор формальдегида в объеме, равном половине объема буферного раствора, перемешивают и выдерживают в течение 10 мин. закрыв предатрительно колбу пробкой. Затем содержимое титруют раствором 2.6-дихлор-фенолиндофенолята натрия.

2.4.3. Потенциометрическое титрование

2.4.3.1. В стакан вместимостью 50 см 3 вносят пипеткой объем экстракта, полученного по п. 2.4.1, но не более 25 см 3 , прибаатяют экстрагирующий раствор приблизительно до объема 30 см 3 и погружают электроды рН-метра-милливольтметра так. чтобы при перемешивании они нс касались магнитного стержня мешалки. Затем титруют потенциометрически из микробюретки раствором

2.6- дн\лорфснолнндофенолята натрия. Раствор 2.6-дихлорфснолиндофснолята натрия прибаатяют порциями по 0.1—0,2 см 3 при постоянном перемешивании. Записывают показания прибор;) в милливольтах. соответствующие каждому прибаатенному объему раствора 2,6-дихлорфснолнндофснолята натрия. При титровании стрелка прибора сначала отклоняется атево. затем ее движение замедляется и после точки эквивалентности стрелка отклоняется вправо. Объем раствора 2,6-дихлорфснолиндофено-лята натрия, соответствующий точке эквивалентности и. следовательно, израсходованныи на титрование объема, устанавливают по максимальной разнице («скачку») двух соседних показаний прибора или по потенциометрической кривой зависимости величины потенциала в милливольтах от объема раствора

2.6- днхлорфснолнндофснодята натрия в кубических сантиметрах.

2.4.3.2. Одновременно проводят контрольное испытание на содержание в продукте редуцирующих веществ так. как указано в п. 2.4.2.2. Раствор титруют потенциометрически.

2.4.3.3. За результат титровании принимают среднее арифметическое результатов двух титрований одного экстракта. При повторном титровании в области предполагаемой точки эквивалентности раствор 2.6-дихлорфснолнндофснолята натрия прибавляют по 1—2 капли.

2.5.1. Массовую долю аскорбиновой кислоты (X) в процентах вычисляют по формуле

где У, — объем раствора 2.6-днхлорфснолиндофенолята натрия, израсходованный на титрование экстракта пробы, см 3 ;

У₂ — объем раствор;) 2.6-дихлорфенолиндофенолята натрия, израсходованный на контрольное испытание, см 3 ;

Г—титр раствора 2.6-дихлорфенолнндофенолята натрия, г/см 3 ;

Г₃ — объем экстракта, полученный при экстрагировании витамина С из навески продукта. см 3 ;

V₄ — объем экстракта, используемый для титрования, см 3 ;

/л — масса навески продукта, г.

2.5.2. За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Вычисления проводят до четырех значащих цифр после запятой, результат округляют до трех значащих цифр и выражают в виде произведения числа на 10“ 3 .

Расхождение между двумя параллельными определениями не должно превышать 3 % от среднего арифметического значения при доверительной вероятности Р = 0.95.

Метод основан на экстрагировании витамина С метафосфорной кислотой или смесью уксусной и метафосфорной кислот, восстановлении 2,6-дихлор -1 , с центрифужными пробирками с притертыми пробками вместимостью 25 см 3 .

Колориметр фотоэлектрический лабораторный или спектрофотометр, обеспечивающие измерение оптической плотности при длине волны Х_тал = (500 ± 10) им.

Воронки делительные стеклянные но ГОСТ 25336 вместимостью 50 см 3 .

Прибор для перегонки на шлифах.

Эфир уксусной кислоты амиловый (амилацетат).

Эфир уксусной кислоты бутиловый (бугнлаиетат) по ГОСТ 22300.

Гидрохинон, полунасыщсниый раствор в ацетоне.

3.3. Подготовка к испытанию

3.3.1. Приготовление растворов по п. 2.3 со следующим дополнением

3.3.1.1. Приготовление полунасыщснного раствора гидрохинона.

Сначала готовят насыщенный раствор гидрохинона в ацетоне. Для этого I г гидрохинона растворяют в 10 см 3 ацетона и фильтруют. Полунасышенный раствор гидрохинона готовят смешиванием одного объема насыщенного раствора с таким же объемом ацетона.

3.3.1.2. Органический растворитель не должен содержать окисляющих веществ. Проверку его чистоты осуществляют следующим образом: к I см 3 раствора 2.6-дихлорфенолиндофенолята натрия сначала прибавляют раствор аскорбиновой кислоты до обесцвечивания, затем добавляют 10 см 3 растворителя, взбалтывают и оставляют на 10 мин. Если органический слой будет окрашен, то его следует очистить перегонкой, собирая фракцию, перегоняющуюся соответственно при температурах: амилацетат — при 149 ’С, бутилаиетат — при 126 *С, ксилол — при 137—141 ‘С.

Использованный после испытания органический растворитель очищают перегонкой, как указано выше.

Все работы с органическим растворителем следует проводить в вытяжном шкафу.

3.3.2. Построение градуировочного графика

Дтя построения градуировочного графика готовят пять растворов. Для этого в центрифужные пробирки или делительные воронки вносят: в первую — 5,0 см 3 экстрагирующего раствора кислот, в остальные последовательно по 0.2: 0.4; 0.6; 0.8 см 3 раствора 2.6-дихлорфенолнндофенолята натрия и доба&ляют экстрагирующий раствор до объема 5,0 см 3 . Во все пробирки шли делительные воронки прибавляют по 5 см 3 ацетатного буферного раствора, иеремешиатют и затем прибааляют по 10 см 3 органического растворителя.

Пробирки или делтельные воронки закрыатют пробками и содержимое перемешивают в течение 10 с. Пробирки центрифугируют, а воронки остааляют в покое до разделения слоев. Органический слой переносят в кювету с расстоянием между рабочими гранями 10 мм и измеряют его оптическую плотность при длине волны 500 нм. В качестве контрольного раствор;! сравнения используют чистый растворитель.

По полученным данным строят график зависимости оптической плотности органического экстракта 2,6-дихлорфснолиндофснолята натрия от объема раствора 2,6-днхлорфснолиндофснолята натрия в кубических сантиметрах.

Построение градуировочного графика проводят для каждого свежеприготовленного раствора

Экстрагирование витамина С из продукта проводят по п. 2.4.1.

3.4.2. В центрифужную пробирку или делительную воронку вносят пипеткой от I до 5 см 3 экстракта испытуемой пробы, добавляют экстрагирующего раствора до объема 5 см 3 , такой же объем

ацетатного буферного раствора и раствор 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия в объеме не более 2 см 3 . Перемешивают и прибавляют 10 см 3 органического растворителя. Далее испытание проводят

При получении мутного органического экстракта перед измерением оптической плотности экстракт фильтруют через фильтровальную бумагу.

3.4.3. Одновременно проводят контрольное испытание на содержание в продукте редуцирующих веществ. Дтя этого в центрифужную пробирку или делительную воронку вносят такие же объемы экстракта и ацетатного буферного раствора, как при испытании исследуемой пробы по п. 3.4.2. прибавляют раствор формальдегида в объеме, равном половине объема буферного раствора, перемешивают и выдерживаю! в течение 10 мин. После этого прибавляют раствор 2,6-дихлорфено-линдофенолята натрия, снова перемешивают и прибавляют 10 см 3 органического растворителя. Затем продолжают испытание по п. 3.3.2.

3.4.4. При содержании в продукте растворимых в органическом растворителе красящих веществ их влияние определяют следующим образом: после проведения испытания по п. 3.4.2 в кювету с органическим экстрактом прибавляют две капли полунасыщеиного раствора гидрохинона, перемешивают палочкой, выдерживают 30 с и снова измеряют оптическую плотность. Полученное значение оптической плотности вычитают из начального значения оптической плотности органического экстракта.

3.5.1. Массовую долю аскорбиновой кислоты 3 ;

У₂ — объем избытка раствора 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия, найденный по градуировочному графику, см 3 ;

У₃ — объем раствора 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия, израсходованный на контрольное испытание, см 3 ;

Г—тигр раствора 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия, г/см 3 ;

У₄ — объем экстракта, полученный при экстрагировании витамина С из навески продукта,

Уу — объем экстракта, используемый для испытания, см 3 ;

m — масса навески продукта, г.

3.5.2. За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Вычисления проводят до четырех значащих цифр после запятой, результат округляют до трех значащих цифр и выражают в виде произведения числа на 10 -3 .

Расхождение между двумя пархисльными определениями не должно превышать 3 % от среднего арифметического значения при доверительной вероятности Р ■ 0,95.

4. ТИТРИМ ЕТРИЧЕСКИЙ МЕТОД С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ЦИСТЕИНА

Метод основан на экстрагировании витамина С из продукта раствором метафосфорной кислоты, восстановлении дегидроаскорбиновой кислоты в аскорбиновую цистеином солянокислым при pH 7,0—7,5, устранении влияния редуцирующих веществ в присутствии формальдегида при pH, близком к нулю, и титровании раствором 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия. Метод применяется при возникновении разногласий в оценке качества.

4.2. Аппаратура, материалы и реактивы

Для проведения испытания применяют аппаратуру, материалы и реактивы по и. 2.2 со следующим дополнением.

Термостат электрический с водяной рубашкой или суховоздушный, обеспечивающие измерение температуры (37 ± 1)*С.

Колбы мерные лабораторные стеклянные по ГОСТ 1770 вместимостью 50 см 3 .

Калий фосфорнокислый двузамещенный по ГОСТ 2493, раствор с массовой долей 45 %.

Кислота серная по ГОСТ 4204, раствор с объемной долей 50 %.

4.3. Подготовка к испытанию

4.3.1. Приготовление растворов по п. 2.3.1 со следующим дополнением.

Свежеприготовленный раствор цистеина в растворе соляной кислоты; готовят следующим

образом: 50 мг цистеина растворяют в 4 см-‘ дистиллированной волы, прибавляют I см 3 раствора соляной кислоты плотностью 1,19 г/см 3 и перемешивают.

Экстрагирование витамина С из продуктов проводят no п. 2.4.1.

4.4.2. От 10 до 20 см 3 экстракта пипеткой приливают в мерную колбу вместимостью 50 см 3 . Одновременно в стакан вместимостью 50 см 3 вносят такой же объем экстракта и приливают порциями раствор фосфорнокислого калия двузамешенного до установления pH 7.0—7,5, измеряя его с помощью pH-метра. Отмечают объем раствора фосфориокистого калия. После этого в колбу с экстрактом вносят 50 мг цистерна или его раствор, перемешивают до растворения и прибавляют установленный объем фосфорнокислого калия. Колбу закрывают пробкой и выдерживают в термостате при 37 *С в течение 30 мим. После этого раствор в колбе охлаждают, подкисляют раствором серной кислоты до pH. близкого к нулю, и снова охлаждают. Необходимый для подкисления объем серной кнеюты также устанавливают предварительно, пользуясь pH-метром, используя для этого стакан с экстрактом после прибавления в него фосфорнокислого калия. Раствор в колбе доводят до метки экстрагирующим раствором и перемешивают.

В колбу вместимостью 50 или 100 см 3 — для визуального титрования или стакан вместимостью 50 см 3 — для потенциометрического титрования вносят пипеткой от 10 до 20 см 3 полученного раствора, прибавляют 2—3 см’ раствора формальдегида, закрывают крышкой и выдерживают 8 мин, приливают раствор метафосфорной кислоты до объема 30 см 3 . Затем титруют раствором 2.6-дихлор-фенолиндофенолята натрия: светлоокрашенные растворы — визуальным титрованием, темноокра-шенные — потенциометрическим титрованием, как указано в пп. 2.4.2, 2.4.3.

За результат титрования принимают среднее арифметическое результатов двух титрований одного раствора.

4.5.1. Массовую долю витамина С (Я,) в процентах вычисляют по формуле

где У, — объем раствора 2,6-днхлорфенолиндофенолята натрия, израсходованный на титрование,

Т — титр раствора 2,6-днхлорфенолиндофенолята натрия, г/см 3 ;

V₂ — объем экстракта, полученный при экстрагировании витамина С из навески продукта.

У_у — объем раствора, полученный после восстановления, см 3 ;

У₄ — объем экстракта, используемый ятя восстаноатсння, см’;

Уу — объем раствора, используемый для титрования, см 3 ;

m — масса навески продукта, г.

4.5.2. За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Вычисления проводят до четырех значащих цифр после запятой, результат округляют до трех значащих цифр и выражают в виде произведения числа на 10

Расхождение между двумя параллельными определениями не должно превышать 3 % от среднего арифметического значения при доверительной вероятности Р = 0,95.

5. флуоромктрич некий метод

Метод основан на экстрагировании витамина С из продукта раствором метафосфорной кислоты или смесью уксусной и метафосфорной кислот, окислении аскорбиновой кислоты активированным углем в дегидроаскорбиновую кислоту, взаимодействии ее с о-фенилендиамнном с образованием флуоресцирующего соединения и измерении интенсивности флуоресценции при алии ах волн 350 нм возбуждающего и 430 нм излучаемого света. Фоновую флуоресценцию измеряют

после образования нефлуоресцирующего соединения дегнороаскорбиновой кислоты с борной кислотой.

5.2. Аппаратура, материалы и реактивы

Для проведении испытания применяют аппаратуру, материалы и реактивы по п. 2.2 со следующим дополнением.

Флуориметр лабораторный, обеспечивающий измерение светового потока с длиной волны (350 ± 30) им возбуждающего и (430 ± 10) нм излучаемого света, с погрешностью не более 2.5 %.

Шкаф сушильный, обеспечивающий поддержание температуры нагрев;) 115 ‘С, с погрешностью не более 5 ’С.

Насос вакуумный пластинчато-роторный и золотниковый.

Воронки лабораторные стеклянные с фильтрами из спекшегося стеклянного порошка по ГОСТ 25336. класс фильтра ПОР 16.

Воронка лабораторная фарфоровая Бюхнера по ГОСТ 9147 с наружным диаметром от 80 до 130 мм.

Колба лабораторная стеклянная с тубусом для фильтрования в вакууме по ГОСТ 25336 вместимостью не менее 1000 см 3 .

Колба мерная лабораторная стеклянная по ГОСТ 1770 вместимостью 25 см 3 .

Пробирки стеклянные с взаимозаменяемым конусом по ГОСТ 25336 вместимостью 10, 25 см 3 .

Чашка лабораторная фарфоровая выпарительная по ГОСТ 9147 вместимостью не менее 150 см 3 .

Натрий уксуснокислый 3-водный по ГОСТ 199. раствор с массовой концентрацией 500 г/дм 3 .

Кислота аскорбиновая, раствор с массовой концентрацией 0.06 г/дм 3 . Готовят перед проведением испытания.

Кислота борная по ГОСТ 9656, раствор с массовой долей 3 % в растворе уксуснокислого натрия. Готовят непосредственно перед проведением испытания.

Кислота соляная по ГОСТ 3118 плотностью 1,19 г/см 3 , раствор с объемной долей 10 %.

о-фенилендиамнн солянокислый, раствор массовой концентрацией 0.2 г/дм 3 . Готовят перед проведением испытания.

Для проведения испытания, если нет других указаний, применяют реактивы квалификации «чистый для анализа» (ч.д.а.) или «химически чистый» (х.ч.) и дистиллированную воду или воду эквивалентной чистоты.

5.3. Подготовка к испытанию

5.3.1. Приготовление растворов по n. 2.3.1 со следующим дополнением.

5.3.1.1. Стандартный раствор аскорбиновой кислоты концентрации 0,06 г/дм 3

Для приготовления раствора концентрации 0,06 г/дм 3 в мерную колбу вместимостью НЮ см 3 вносят 6.0 см 3 раствора аскорбиновой кислоты концентрации 1.0 г/дм 3 , полученного по п. 2.3.2, доводят экстрагирующим раствором до метки и перемешивают.

5.3.1.2. Обработка активированного угля

200 г угля помешают в колбу вместимостью 2000 см 3 , прибавляют I дм 3 раствор;) соляной кислоты, доводят до кипения и фильтруют через воронку Бюхнера в вакууме. Уголь переносят в стакан вместимостью 1000 см 3 , прибавляют I дм 3 дистиллированной воды, перемешивают и снова фильтруют через воронку Бюхнера, еще раз смешивают уголь с I дм 3 воды и фильтруют. Обработку водой повторяют. Отфильтрованный уголь помешают в фарфоровую чашку и высушивают при температуре 115 *С в течение 12—14 ч в сушильном шкафу. Хранят в склянке с притертой пробкой.

Экстрагирование В1гтамнна С из продукта проводят раствором метафосфорной кислоты или смесью уксусной и метафосфорной кислот по п. 2.4.1.

5.4.2. Берут две колбы вместимостью 250 см 3 . В одну из них вносят 50 или 100 см 3 испытуемого экстракта, в другую —такой же объем стандартного раствора аскорбиновой кислоты концентрации 0.06 или 0,1 г/дм 3 . Затем в обе колбы прибавляют соответственно по I или 2 г активированного угля, тщательно перемешивают и фильтруют через воронку с фильтрами из пористой пластинки или фильтровальной бумаги, отбрасывая первые порции фильтрата.

5.4.3. Анализируемые растворы. В две мерные колбы вместимостью 25 см 3 помешают по 5 см 3 раствора уксуснокислого натрия, затем в одну прибавляют 5 см 3 фильтрата анализируемой пробы, в другую — 5 см 3 фильтрата стандартного раствора, полученных по п. 5.4.2. Содержимое колб доливают до метки дистиллированной водой и перемешиваю).

5.4.4. Контрольные растворы. Для установлении влиянии фоновой флуоресценции в две мерные колбы вместимостью по 25 см 3 каждая помешают по 5 см 3 раствора борной кислоты и по 5 см 3 фильтрата, полученного по п. 5.4.2: в одну — испытуемую пробу, в другую — стандартный раствор. Растворы в колбах выдерживают в течение 15 мин. периодически встряхивая; затем доливают до метки дистиллированной водой и перемешивают.

5.4.5. Каждый раствор, полученный по пп. 5.4.3 и 5.4.4. вносят по 2 см 3 пипеткой в две пробирки. Всего восемь пробирок. Затем во все пробирки прибавляют по 5 см 3 раствора о-фени-ленднамнна. тщательно перемешивают и выдерживают в темноте 35 мин.

5.4.6. Измеряют интенсивность флуоресценции растворов, полученных по п. 5.4.5, при длинах волн 350 нм возбуждающего и 430 нм излучаемого света.

5.5.1. Массовую долю витамина С (Х_у) в процентах вычисляют по формуле

где А — среднее значение интенсивности флуоресценции раствора анализируемой пробы;

В — среднее значение интенсивности флуоресценции контрольного раствора анализируемой пробы;

£ —среднее значение интенсивности флуоресценции стандартного раствора:

D — среднее значение интенсивности флуоресценции контрольного стандартного раствора: с — массовая концентрация стандартного раствора аскорбиновой кислоты, г/дм 3 ;

Г—общий объем экстракта, полученный при экстрагировании витамина С из навески продукта, см 3 ; т — масса навески продукта, г.

5.5.2. За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Вычисления проводят до четырех значащих цифр после запятой, результат округляют до трех значащих цифр и выражают в виде произведения числа на К) -3 .

Расхождение между двумя параллельными определениями нс должно превышать 3 % от среднего арифметического значения при доверительной вероятности Р ■ 0.95.

источник

Витамин с в напитках гост